這篇論文研究了研究綠原酸（Chlorogenic Acid, CHA）對膠質(zhì)瘤（Glioma）免疫微環(huán)境的調節作用，以及其在小鼠模型和臨床實(shí)踐中的潛在應用。研究通過(guò)單細胞RNA測序（scRNA-seq）揭示了膠質(zhì)瘤相關(guān)巨噬細胞（Tumor-Associated Macrophages, TAMs）的亞群和功能特征，并探討了CHA對免疫微環(huán)境的調節作用及其臨床應用潛力。

背景知識

1、膠質(zhì)瘤是成人中最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腦腫瘤，尤其是膠質(zhì)母細胞瘤（GBM），預后極差。

2、免疫治療為膠質(zhì)瘤患者帶來(lái)了新希望，但由于膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境（TME）的高度免疫抑制性，治療效果受限。

3、腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAMs）是TME中最重要的細胞群體之一，主要包括組織駐留巨噬細胞（如小膠質(zhì)細胞）和骨髓來(lái)源的單核/巨噬細胞（BMDMs）。

4、綠原酸（CHA）是一種天然酚酸，具有抗微生物、免疫調節、抗氧化和抗癌等多種生物活性。

研究方法

1、使用CHA處理小鼠模型，通過(guò)單細胞RNA測序（scRNA-seq）分析骨髓來(lái)源的單核巨噬細胞（BMDMs）和小膠質(zhì)細胞的分化軌跡和功能特性。

2、構建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò )和分子對接模型，使用目標預測數據庫進(jìn)行靶點(diǎn)預測。

3、臨床案例中，一名患者在接受CHA治療后存活5年6個(gè)月，并在9個(gè)月后達到部分緩解（PR），且無(wú)任何新的癥狀或毒性副作用。

實(shí)驗設計

1、在C57BL6/N小鼠中建立GL261-Luc細胞的原位移植模型，CHA處理組每天腹腔注射40mg/kg CHA，對照組注射生理鹽水。通過(guò)小動(dòng)物體內成像系統記錄腫瘤生長(cháng)情況。

2、提取實(shí)驗組和對照組小鼠的腦組織，進(jìn)行單細胞懸液制備和scRNA-seq分析。使用Seurat（v4.4.0）進(jìn)行數據處理和分析，識別免疫細胞、單核巨噬細胞、小膠質(zhì)細胞、T細胞、NK細胞和B細胞。

3、通過(guò)偽時(shí)間分析和基因集變異分析（GSVA）研究細胞分化軌跡和基因表達變化。

關(guān)鍵結論

1、CHA對小鼠模型的影響

CHA顯著(zhù)抑制了膠質(zhì)瘤的生長(cháng)，延長(cháng)了小鼠的生存時(shí)間。

實(shí)驗組小鼠的腫瘤生物發(fā)光強度顯著(zhù)降低，生存率顯著(zhù)提高。

2、TAMs的亞群和功能特征

scRNA-seq分析揭示了TAMs的異質(zhì)性，包括小膠質(zhì)細胞和BMDMs的多個(gè)亞群。

CHA處理后，小膠質(zhì)細胞的特征評分降低，而單核/巨噬細胞評分增加，表明小膠質(zhì)細胞可能向巨噬細胞特征轉變。

3、BMDMs的分化軌跡

通過(guò)偽時(shí)間分析，研究了BMDMs在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的分化軌跡，從單核細胞到過(guò)渡態(tài)intMoMF，再到功能分化的TAM1、TAM2、TAM3和樹(shù)突狀細胞（DCs）。

TAM1表現出較強的M1型極化趨勢，而TAM3則表現出更多的免疫抑制基因表達。

4、CHA對免疫微環(huán)境的調節

CHA顯著(zhù)增強了巨噬細胞的抗原呈遞功能和T細胞免疫激活相關(guān)基因表達。

CHA通過(guò)JAK-STAT通路激活小膠質(zhì)細胞，改善抗腫瘤功能，并與STAT1具有良好的親和力。

5、臨床應用潛力

一例復發(fā)性膠質(zhì)瘤患者接受CHA治療后，生存期達到5年6個(gè)月，治療9個(gè)月后部分緩解（PR），且無(wú)新癥狀或毒性副作用。

該研究為CHA的臨床應用提供了理論和實(shí)踐支持，表明其在改善免疫微環(huán)境和抗腫瘤效果方面具有潛力。

研究意義

這項研究不僅揭示了膠質(zhì)瘤相關(guān)巨噬細胞的亞群和功能特征，還闡明了CHA對免疫微環(huán)境的調節作用，為開(kāi)發(fā)針對膠質(zhì)瘤的免疫治療策略提供了新的見(jiàn)解和潛在的治療靶點(diǎn)。

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